Работа № 2. Методы создания анаэробных условий

Работа № 2. Методы создания анаэробных условий

1) Физические способы. Способы основаны на выращивании микробов в среде без воздуха

•Посев в среды, содержащие редуцирующие и просто окисляемые вещества:

В качестве редуцирующих веществ обычно употребляют куски (около 0,5 г) животных либо растительных тканей (печень, мозг, почки, селезенка, кровь, картофель, вата). Эти ткани связывают растворенный в среде кислород и адсорбируют бактерии Работа № 2. Методы создания анаэробных условий. Чтоб уменьшить содержание кислорода в питательной среде, ее перед посевом кипятят 10-15 мин, а потом стремительно охлаждают и заливают сверху маленьким количеством стерильного вазелинового масла. Высота слоя масла в пробирке около 1 см. В качестве просто окисляемых веществ употребляют глюкозу, лактозу и муравьино-кислый натрий.

Наилучшей водянистой питательной средой с редуцирующим субстанциями является среда Работа № 2. Методы создания анаэробных условий тиогликолевая которая употребляется для скопления анаэробов при первичном посеве из исследуемого материала и для поддержания роста выращенной незапятанной культуры анаэробов.

•Посев микробов в глубину плотных питательных сред. Посев уколом

Техника посева.Посев уколом в столбик агара (сладкий агар) применяется для выкармливания анаэробов либо выявления соответствующего признака микроорганизма Работа № 2. Методы создания анаэробных условий, потому что рост по уколу типичен для ряда микробов и долгого хранения культур. При посеве уколом в пробирку с прямым агаром либо столбиком желатины держат дном наверх, вынимают пробку и обжигают край пробирки. Материал, содержащий бактерии, забирают простерилизованной на пламени длинноватой совсем прямой платиновой иглой и прокалывают ею столбик питательной среды снизу Работа № 2. Методы создания анаэробных условий ввысь практически до самого дна пробирки. Вынимают иглу, обжигают край пробирки и пробки, закрывают пробирку, прожигают иглу, ставят ее в подставку, надписывают пробирку и помещают в штатив.

• Посев по методу Веньяль-Вейона

Техника посева.Берут стеклянную трубку длиной 30 см и поперечником 3-6 мм. Один конец трубки вытягивают в капилляр в виде Работа № 2. Методы создания анаэробных условий пастеровской пипетки, а у другого конца делают перетяжку. В оставшийся широкий конец трубки вставляют ватную пробку. В пробирки с расплавленным и охлажденным до 50оС агаром засевают исследуемый материал. Потом помещают агар с посевом в стерильные трубки Веньяль-Вейона. Капиллярный конец трубки запаивают в пламени горелки и трубки Работа № 2. Методы создания анаэробных условий помещают в термостат. Так создаются подходящие условия для роста самых серьезных анаэробов. Для выделения отдельной колонии трубку надрезают ратфилем, соблюдая правша асептики, на уровне колонии, разламывают, а колонию захватывают стерильной петлей и переносят в пробирку с питательной средой для предстоящего выкармливания и исследования в чистом виде.

• Механическое удаление воздуха Работа № 2. Методы создания анаэробных условий из сосудов, в каких выращиваются анаэробные мельчайшие организмы

Удаление воздуха создают методом его механического откачивания из особых устройств - анаэростатов, в которые помещают чашечку с посевом анаэробов. Переносной анаэростат представляет собой толстостенный железный цилиндр с отлично притертой крышкой (с резиновой прокладкой), снабженный отводящим краном и вакуумметром. После размещения засеянных чашек либо Работа № 2. Методы создания анаэробных условий пробирок воздух из анаэростата убирают при помощи вакуумного насоса.

• Подмена воздуха в сосуде любым равнодушным газом

Подмену воздуха равнодушным газом (азотом, водородом, аргоном) можно создавать в тех же анаэростатах методом вытеснения его газом из баллона.

2) Хим способы основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически закрытом сосуде (анаэростате, эксикаторе) такими субстанциями, как пирогаллол Работа № 2. Методы создания анаэробных условий либо гидросульфит натрия

3) Био способы основаны на совместном выращивании анаэробов со

серьезными аэробами (способ Фортнера)

Для этого из застывшей агаровой пластинки по поперечнику чашечки вырезают стерильным скальпелем полоску агара шириной около 1 см. Выходит 2 агаровых полудиска в одной чашечке. На одну сторону агаровой пластинки засевают аэроб, к примеру, нередко Работа № 2. Методы создания анаэробных условий употребляют Staphylococcus aureus либо Serratia marcescens. На другую сторону засевают анаэроб. Края чашечки заливают расплавленным парафином и помещают в термостат. При наличии подходящих критерий в чашечке начнут плодиться аэробы. После того как весь кислород в пространстве чашечки будет ими применен, начнется рост анаэробов (через 3-4 суток). В целях сокращения воздушного места Работа № 2. Методы создания анаэробных условий в чашечке питательную среду наливают может быть более толстым слоем.

4) Комбинированные способы основаны на сочетании физических, хим и био способов сотворения анаэробиоза

Работа № 3.Культивирование вирусов

Для культивирования вирусов употребляют:

1) Куриные зародыши. Куриный зародыш - комфортная модель для культивирования вирусов с целью получения вирусов и для изготовления исследовательских, профилактических и целительных препаратов - диагностикумов и вакцин Работа № 2. Методы создания анаэробных условий. Куриные эмбрионы употребляют в возрасте от 8 до 12 дней, перед инфецированием заразным материалом скорлупу яичка над воздушной камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают, смазывают йодом (2% настойка), вторично протирают спиртом и обжигают. Вируссодержащий материал, обработанный для удаления бактериальной флоры, в асептичных критериях наносят на хорион-аллантоисную оболочку либо вводят в желточный Работа № 2. Методы создания анаэробных условий мешок, аллантоисную полость, или в амнион (ткань зародыша). После инфецирования в аллантоисную полость отверстие заливают парафином; если материалом заражают хорионаллантоис, отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом, края которого замазывают парафином. После инфицирования зародыши помещают в термостат при 37°С. Признаки репродукции вируса появляются в особенности верно в месте инфецирования на хорионаллантоисной Работа № 2. Методы создания анаэробных условий оболочке в виде очагов поражения и геморрагий.

2) Культуру клеток (тканей). Клеточки получают из тканей животных и человека. Их делят:

- на первичные, которые употребляют в течение одной генерации. Первичные клеточки получают из эпителиальной либо соединительной ткани. Они вырастают в суспензии, при оседании крепко прикрепляются к стене флакона либо пробирки Работа № 2. Методы создания анаэробных условий в виде монослоя.

- полуперевиваемые сохраняются в течение 50 пассажей либо года. Они относятся к соматическим диплоидным клеточкам человека, которые не претерпевают злокачественного перерождения.

- перевиваемые, которые долгое время плодиться in vitro. Однослойные культуры клеток готовят из обычных, почаще эмбриональных линий клеток (клеточки амниона человека, почек мортышки) и злокачественных линий клеток (злокачественные Работа № 2. Методы создания анаэробных условий клеточки HeLa, сначало выделенные из карценомы шеи матки, Hep - 3 из лимфоидной карценомы).

Репродукция вирусов в культуре клеток сопровождается цитопатическим действием (ЦПД); которое проявляется в изменении морфологии клеток и их смерти. Нрав и время проявления ЦПД находится в зависимости от вида вируса

3) Лабораторных животных (белоснежных мышей, хомячков, крыс, зайчиков и т.д.). Их Работа № 2. Методы создания анаэробных условий употребляют для сотворения моделей вирусных заразных заболеваний и выделение вирусов. Чувствительность животных к вирусам находится в зависимости от вида животного и его возраста. Репродукция вируса сопровождается клиническими проявлениями заболевания либо смертью животного


rabochaya-uchebnaya-programma-po-discipline-proektirovanie-svarnih-konstrukcij-dlya-specialnosti-120500-oborudovanie-i-tehnologiya-svarochnogo-proizvodstva.html
rabochaya-uchebnaya-programma-po-discipline-psihologiya-i-pedagogika-po-napravleniyu-podgotovki-060103-pediatriya.html
rabochaya-uchebnaya-programma-po-discipline-socialnaya-rabota-ochnaya-forma-obucheniya-po-napravleniyu-podgotovki.html